Elektroforéza je laboratórna technika uskutočňovaná s cieľom separácie molekúl podľa ich veľkosti a elektrického náboja, aby bolo možné stanoviť diagnózu chorôb, overiť expresiu proteínov alebo identifikovať mikroorganizmy.
Elektroforéza je jednoduchý a lacný postup, ktorý sa používa v laboratórnych postupoch a vo výskumných projektoch. Podľa účelu elektroforézy môže byť potrebné napríklad vykonať ďalšie testy a vyšetrenia, aby sa zistila diagnóza.
Načo to je
Elektroforézu je možné vykonať na niekoľko účelov, a to ako vo výskumných projektoch, tak aj v diagnostike, pretože ide o jednoduchú a nízkonákladovú techniku. Môže sa teda vykonať elektroforéza na:
- Identifikujte vírusy, huby, baktérie a parazity, pričom táto aplikácia je vo výskumných projektoch bežnejšia;
- Test otcovstva;
- Skontrolujte expresiu proteínov;
- Identifikujte mutácie, ktoré sú užitočné napríklad pri diagnostike leukémií;
- Analyzujte typy cirkulujúceho hemoglobínu, ktoré sú užitočné pri diagnostike kosáčikovitej anémie.
- Posúďte množstvo bielkovín prítomných v krvi.
Na účely elektroforézy môže byť na vykonanie diagnózy potrebné vykonať ďalšie doplňujúce testy pre lekára.
Ako sa to robí
Na uskutočnenie elektroforézy je nevyhnutný gél, ktorým môže byť v závislosti na objekte polyakrylamid alebo agaróza, elektroforetický pufor a nádoba, marker molekulovej hmotnosti a fluorescenčné farbivo, navyše k UV alebo LED svetelnému zariadeniu známemu tiež ako transilluminátor.
Po príprave gélu je potrebné umiestniť špecifický predmet, aby sa jamky v géli, ľudovo nazývané hrebeň, vytvorili a nechali gél stuhnúť. Keď je gél hotový, stačí látky natrieť do jamiek. Na tento účel musí byť do jednej z jamiek umiestnený marker molekulovej hmotnosti, pozitívna kontrola, čo je látka, o ktorej je známe, že to je, negatívna kontrola, ktorá zaručuje platnosť reakcie, a vzorky, ktoré majú byť analyzované. Všetky vzorky musia byť zmiešané s fluorescenčným farbivom, aby bolo možné vizualizovať pásy na transiluminátore.
Gél so vzorkami sa musí vložiť do nádoby na elektroforézu, ktorá obsahuje špecifický tlmivý roztok, a potom sa prístroj zapne tak, aby v ňom bol elektrický prúd a následne rozdiel potenciálov, čo je dôležité pre separáciu častíc podľa na ich zaťaženie a veľkosť. Elektroforetická doba chodu sa líši podľa účelu postupu a môže trvať až 1 hodinu.
Po stanovenom čase je možné zobraziť výsledok elektroforetického priebehu transiluminátora. Ak je gél umiestnený pod UV alebo LED svetlom, je možné vizualizovať pásový vzor: čím väčšia je molekula, tým menej migruje, približuje sa k jamke, zatiaľ čo ľahšia je molekula, tým väčší je migračný potenciál.
Na validáciu reakcie je potrebné, aby boli pásy pozitívnej kontroly vizualizované a aby pri negatívnej kontrole nebolo vizualizované nič, inak je to indikatívne, že došlo ku kontaminácii a celý proces sa musí opakovať.
Druhy elektroforézy
Elektroforéza sa môže uskutočniť na rôzne účely a podľa jej účelu sa môže použiť niekoľko druhov gélu, najbežnejším je polyakrylamid a agaróza.
Elektroforéza na identifikáciu mikroorganizmov sa bežnejšie vykonáva vo výskumných laboratóriách, avšak na diagnostické účely sa môže elektroforéza použiť na identifikáciu hematologických chorôb a chorôb, ktoré sa vyvíjajú so zvýšením množstva proteínov, čo sú hlavné typy elektroforézy:
1. Elektroforéza hemoglobínu
Elektroforéza hemoglobínu je laboratórna technika vykonávaná na identifikáciu rôznych typov hemoglobínu cirkulujúcich v krvi, čo umožňuje identifikovať prítomnosť chorôb súvisiacich so syntézou hemoglobínu. Typ hemoglobínu sa identifikuje pomocou elektroforézy pri špecifickom pH, ideálne medzi 8,0 a 9,0, pričom sa overí vzor pruhov, ktorý sa dá porovnať s normálnym vzorcom, čo umožňuje identifikáciu prítomnosti abnormálnych hemoglobínov.
Na čo sa robí: Elektroforéza hemoglobínu sa robí okrem iných užitočných látok na odlíšenie talasémie aj na vyšetrenie a diagnostiku chorôb spojených so syntézou hemoglobínu, ako je kosáčikovitá anémia a choroba hemoglobínu C. Naučte sa, ako interpretovať elektroforézu hemoglobínu.
2. Proteínová elektroforéza
Elektroforéza bielkovín je vyšetrenie, ktoré požaduje lekár na vyhodnotenie množstva bielkovín cirkulujúcich v krvi, a teda na identifikáciu chorôb. Tento test sa vykonáva zo vzorky krvi, ktorá sa odstredí, aby sa získala plazma, časť krvi tvorená okrem iných látok bielkovinami.
Po elektroforéze je možné vizualizovať obrazec pruhov a následne graf, v ktorom je uvedené množstvo každej frakcie proteínov, čo je pre diagnostiku zásadné.
Na čo sa robí: Elektroforéza proteínov umožňuje lekárovi vyšetriť výskyt mnohopočetného myelómu, dehydratácie, cirhózy, zápalu, ochorenia pečene, pankreatitídy, lupusu a hypertenzie podľa pásmového profilu a grafu uvedeného v správe o vyšetrení.
Pochopte, ako sa to robí, a ako pochopiť výsledok elektroforézy bielkovín.
Bola táto informácia nápomocná?
Áno nie
Váš názor je dôležitý! Sem napíšte, ako môžeme vylepšiť náš text:
Nejaké otázky? Kliknutím sem získate odpoveď.
E-mail, na ktorý chcete dostať odpoveď:
Skontrolujte potvrdzovací e-mail, ktorý sme vám poslali.
Tvoje meno:
Dôvod návštevy:
--- Vyberte si dôvod --- ChorobaŽite lepšiePomôžte inej osobeZískajte vedomosti
Ste zdravotnícky pracovník?
NieFyzikFarmaceutický sestrička Výživový poradcaBiomedicínskyFyzioterapeutKozmetička Iné
Bibliografia
- LinkedIn BIOSPHERE, VEDAJÚCI VEDECKÉ CENTRUM. Elektroforéza: koncepty a aplikácie. 2015. Dostupné na :. Prístup k 24. septembru 2019
- KASVI. Čo je to elektroforéza a prečo je dôležitá?. Dostupné v: . Prístup k 24. septembru 2019
